研究粘附分子整合素α5β1在膽囊腺癌中的表達(dá)及其與膽囊腺癌分化、侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系。方法　應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法對57例膽囊腺癌石蠟包埋標(biāo)本進(jìn)行整合素α5β1半定量檢測。結(jié)果　有41例(71.9%)膽囊腺癌組織整合素α5β1表達(dá)減弱或消失，高分化癌的整合素α5 β1陽性率明顯高于低分化癌(P＜0.05)。整合素α5β1陽性率在膽囊癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組低于淋巴結(jié)陰性組(P＜0.05)。整合素α5β1表達(dá)陽性者2年生存率(32.5%)顯著高于表達(dá)陰性者(11.3%，P＜0.05)。結(jié)論　整合素α5β1表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，整合素α5β1表達(dá)與患者預(yù)后相關(guān)，可作為判斷膽囊癌患者預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)膽囊癌發(fā)病率逐年升高，占膽道系統(tǒng)惡性腫瘤的64.7%。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測57例膽囊腺癌石蠟包埋標(biāo)本中粘附分子整合素(integrin)α5β1的表達(dá)并探討其意義。

　　對象和方法

　　1.病例選擇：1988～1994年上海醫(yī)科大學(xué)附屬華山醫(yī)院和中山醫(yī)院手術(shù)切除的原發(fā)性膽囊癌病例標(biāo)本57例，其中男22例，女35例，年齡36～81歲，平均56歲。按1991年WHO病理分類標(biāo)準(zhǔn)，57例均為膽囊腺癌，其中高分化癌18例，分化中等癌26例，分化差的癌13例。依據(jù)1987年UICC的膽囊癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：T1期19例，T2期15例，T3期17例，T4期6例。57例中有37例(64.9%)合并有膽囊結(jié)石。取同期37例慢性膽囊炎的標(biāo)本作為對照。

　　2.標(biāo)本制備及免疫組化染色：兔抗人整合素α5 β1多抗為Sigma公司產(chǎn)品，羊抗兔IgG與兔PAP試劑為Vecter實驗室產(chǎn)品。標(biāo)本經(jīng)福馬林固定、石蠟包埋、連續(xù)切取2張5μm厚切片，1張作常規(guī)HE染色外，另1張用于檢測整合素α5 β1表達(dá)。免疫組化染色采用PAP法。

　　3.整合素α5 β1染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：按腫瘤細(xì)胞著色強度及陽性細(xì)胞分布范圍分為4個等級：無細(xì)胞著色(-)；10%～30%細(xì)胞呈弱、中等強度陽性反應(yīng)(+)；30%細(xì)胞呈強陽性反應(yīng)或30%～60%細(xì)胞呈弱、中等強度陽性反應(yīng)()；＞60%細(xì)胞呈強陽性反應(yīng)()。

　　4.統(tǒng)計學(xué)方法：免疫反應(yīng)結(jié)果及其臨床病理參數(shù)的關(guān)系采用χ2檢驗，生存率計算使用壽命表法，不同分組間生存率差異使用時序檢驗。

　　結(jié)果

　　1. 整合素α5 β1表達(dá)與膽囊癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系：整合素α5β1的表達(dá)慢性膽囊炎和癌旁正常膽囊腺上皮整合素α5 β1多呈強陽性反應(yīng)，其主要分布于腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜及外周胞漿。而在57例膽囊腺癌組織中有41例(71.9%)整合素α5 β1呈陰性或不同程度表達(dá)減弱，在同一個病例，瘤細(xì)胞整合素α5β1的表達(dá)隨其浸潤的深度而不同，特別是侵入肌層或漿膜層的瘤細(xì)胞多趨于明顯減弱或消失。整合素α5β1表達(dá)與腫瘤的分化程度呈正比，即分化差時整合素α5 β1的表達(dá)趨于減少。分化好組整合素α5β1表達(dá)各級例數(shù)為2、1、3、1 2；分化中等組整合素α5 β1表達(dá)-～各級的例數(shù)分別為11、5、7、3；分化差組整合素α5β1表達(dá)-～各級的例數(shù)分別為10、1、1、1。3組比較，差異有顯著性(P＜0.05)。此外，整合素α5β1的表達(dá)明顯減少者臨床趨向于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組整合素α5β1表達(dá)-～各級的例數(shù)分別為4、0、1、1；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組整合素α5β1表達(dá)-～各級的例數(shù)分別為19、7、11、16。兩組比較，差異有顯著性(P＜0.05)。

　　2.整合素α5 β1表達(dá)與膽囊腺癌預(yù)后的關(guān)系　45例膽囊癌病人獲得術(shù)后隨訪，隨訪率為78.5%，患者生存時間為3個月～6年，除去由于術(shù)后并發(fā)癥生存少于6個月的病例，整合素α5β1的表達(dá)減少組平均生存期7個月，無表達(dá)減少組為17個月。Logrank檢驗顯示兩者的生存率差異有顯著性(P＜0.05)。

　　討論

　　膽囊癌的生物學(xué)特性是多呈浸潤性生長，局部轉(zhuǎn)移早，患者的預(yù)后差。本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，57例膽囊癌患者2年中77.8%的病人出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，總的2年生存率僅為22.2%。腫瘤局部的浸潤程度與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)，T4期2年生存率為0%。整合素是由α、β兩條多肽鏈經(jīng)非共價鍵連接而成的異二聚體，主要介導(dǎo)細(xì)胞與基質(zhì)、細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用。兩條鏈均有較長的細(xì)胞外片段、跨膜區(qū)和較短的細(xì)胞內(nèi)片段。細(xì)胞外片段含配體的結(jié)合位點、與調(diào)節(jié)因子作用的功能區(qū)和Ca2+結(jié)合區(qū)。細(xì)胞內(nèi)片段則通過actinin、vinculin、talin、actin等小分子與細(xì)胞骨架相連。各種整合素的結(jié)構(gòu)十分相似，大多數(shù)整合素細(xì)胞外配體結(jié)合部位能識別RGD(精-甘-門冬氨酸)三肽序列，并與含有RGD的多種ECM成分結(jié)合。以往研究顯示細(xì)胞惡變后，瘤細(xì)胞表面的整合素表達(dá)有所改變，這種變化與腫瘤細(xì)胞的侵襲性及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［1，2］。但各種整合素在不同的腫瘤中表現(xiàn)不同，在同一腫瘤的不同部分表現(xiàn)也不同。如侵襲性強的黑色素瘤細(xì)胞表面表達(dá)β3。在黑色素瘤侵襲轉(zhuǎn)移時α6亞單位表達(dá)減少［3］。Feldman等［4］在對小細(xì)胞肺癌的研究中發(fā)現(xiàn)整合素α5β1 mRNA表達(dá)陰性與腫瘤的復(fù)發(fā)相關(guān)。Zutter等［5］發(fā)現(xiàn)整合素α5β1在乳腺癌中的表達(dá)與腫瘤分化有關(guān)。

　　本研究結(jié)果顯示，71.9%的膽囊癌組織中整合素α5 β1表達(dá)減少、丟失，而非腫瘤的膽囊組織只有14.3%表達(dá)減少。整合素α5β1主要分布于腫瘤淺表部位的瘤細(xì)胞，而浸潤膽囊壁肌層的癌細(xì)胞表達(dá)明顯減少，整合素α5β1的表達(dá)與膽囊癌組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示整合素α5β1是分化好、腫瘤無浸潤轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物。本研究顯示大多數(shù)病例腫瘤細(xì)胞整合素α5β1的表達(dá)均有不同程度的減少或消失，腫瘤細(xì)胞表面粘附因子的缺乏可能部分解釋膽囊癌易于局部浸潤和早期轉(zhuǎn)移的特點。手術(shù)標(biāo)本中腫瘤細(xì)胞整合素α5β1的表達(dá)可以作為判斷患者預(yù)后的一個指標(biāo)。